熒光定量PCR實驗時的好方法

實時熒光定量PCR技術(shù)實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，成為核酸分子定量的標(biāo)準(zhǔn)方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材：96孔光學(xué)反應(yīng)板配合光學(xué)膜，0.2ml光學(xué)八聯(lián)反應(yīng)管配合光學(xué)膜，0.2ml光學(xué)八聯(lián)反應(yīng)管配合平蓋的光學(xué)八聯(lián)管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家，例如在使用單管或者8連管做實驗時，如果在樣本數(shù)量不多的時候，建議在樣品加熱塊（TRAY）上對稱的安放樣品，并且先放在第6列或者第7列，然后逐漸向兩邊放置。這樣熱蓋壓下來的時候不至于發(fā)生傾斜，每個反應(yīng)管的受力和受熱都比較均勻，提高了孔與孔之間的數(shù)據(jù)精密性。又例如使用96孔板做實驗的時候，建議使用光學(xué)膜代替蓋子來密封反應(yīng)孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜，然后在橫向，后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機應(yīng)用示例（熒光PCR凍干）：

1. 探針、底物、引物原料要求確定。
2. 凍干溶液配方開發(fā)，采用正交法或響應(yīng)曲面法進行輔料篩選。
3. 選擇適合的包材和模具。
4. 設(shè)計凍干曲線配合輔料篩選。
5. 確定配方及工藝。
6. 穩(wěn)定性測試。
7. 根據(jù)穩(wěn)定性測試結(jié)果修正工藝或配方。
8. 整個環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設(shè)備、人員的結(jié)合。